哪种试剂可使蛋白质的二硫键打开

一、哪种试剂可使蛋白质的二硫键打开

还原剂可以使蛋白质的二硫键打开，比如2-巯基乙醇（beta-ME）、二硫苏糖醇（DTT）

二硫键是2个-SH基被氧化而形成的-S-S-形式的硫原子间的键。打开二硫键就是破坏这种氧化作用，加入适量咐拦的还原剂就可以达到目的。但随着还原老简埋剂被空气中的氧气氧侍蚂化，二硫键也会重新形成。

强还原剂，比如β巯基乙醇、二硫苏糖醇

二、矽、磷、硫

矽是硅的旧称，原子序数14，相对原子质量28.09，有无定形和晶体两种同素异形体。

晶体硅为钢灰色，无定形硅为黑色，密度2.4g／cm3，熔点1420℃，沸点2355℃，晶体硅属于原子晶体，硬而有光泽，有半导体性质。硅的化学性质比较活泼，在高温下能与氧气等多种元素化合，不溶于水、硝酸和盐酸，溶于氢氟酸和碱液，用于造制合金如硅铁、硅钢等，单晶硅是一种重要的半导体材料，用于制造大功率晶体管、整流器、太阳能电池等。硅在自然界分布极广，地壳中约含27.6％，主要以二氧化硅和硅酸盐的形式存在。

造房子用的砖、瓦、砂石、水泥、玻璃，吃饭，喝水用的瓷碗、水杯，洗脸间的洁具，其主要成分都是硅的化合物。人们早在远古时代便使用硅的化合物粘土制造陶器。

磷,原子序数15,原子量30.973762, 磷有白磷、红磷、黑磷三种同素异构体。白磷又叫黄磷为白色至黄色蜡性固体，熔点44.1°C，沸点280°C，密度1.82克/厘米3。白磷活性很高，必须储存在水里，人吸入0.1克白磷就会中毒死亡。白磷在没有空气的条件下，加热到250°C或在光照下就会转变成红磷。红磷无毒，加热到400°C以上才着火。在高压下，白磷可转变为黑磷，它具有层状网络结构，能导电，是磷的同素异形体中最稳定的。

白磷可溶于热的浓碱溶液，生成磷化氢和次磷酸二氢盐；干燥的氯气与过量的磷反应生成三氯化磷，过量的氯气与磷反应生成五氯化磷。磷在充足的空气中燃烧可生成五氧化二磷，如果空气不足则生成三氧化二磷。

约三分之二的磷用于磷肥。磷还用于制造磷酸、烟火、燃烧弹、杀虫剂等。三聚磷酸盐用于合成洗涤剂。 另外生活中常见的安全火柴其主要成分就是红磷。

硫化学符号S，原子序数16，原子量32.066，属周期系ⅥA族。俗称硫黄。硫是古代金丹术所用的重要元素。

硫的氧化物有一氧化硫（SO）、三氧化二硫（S2O3）、二氧化硫（SO2）、三氧化硫（SO3）、七氧化二硫（S2O7）和四氧化硫（SO4），以二氧化硫（亚硫酸酐）和三氧化硫（硫酸酐）最为重要。硫能形成11种含氧酸：次硫酸（H2SO2）、连二亚硫酸（H2S2O4）、亚硫酸（H2SO3）、硫代亚硫酸（H2S2O2）、焦亚硫酸（H2S2O5）、硫酸（H2SO4）、焦硫酸（H2S2O7）、硫代硫酸（H2S2O3）、过一硫酸（H2SO5）、过二硫酸（H2S2O8）、连硫酸（H2SxO6，x＝2～6）。其中亚硫酸既有氧化性，又有还原性，硫酸和焦硫酸具有氧化性。

硫酸是极为重要的化工试剂，在工业上普遍应用。另外，亚硫酸，硫代硫酸钠等也是重要的化工试剂。

三、丙二醛提取的原理

[原理]

植物组织中的丙二醛(MDA) 在酸性条件下加热可与硫代巴比妥酸(TBA) 产生显色反应，反应产物为粉红色的3，5，5一三甲基恶唑2，4一二酮(Trimet—nine)。该物质在539nm波长下有吸收峰。由于硫代巴比妥酸也可与其它物质反应，并在该波长处有吸收，为消除硫代巴比妥酸与其它物质反应的影响，在丙二醛含量测定时，同时测定600nm下的吸光度，利用539nm与600nm下的吸光度的差值计算丙二醛的含量。

植物组织丙二醛含量测定

植物叶片在衰老过程中发生一系列生理生化变化，如核酸和蛋白质含量下降、叶绿素降解、光合作用降低及内源激素平衡失调等。这些指标在一定程度上反映衰老过程的变化。近来大量研究表明，植物在逆境胁迫或衰老过程中，细胞内活性氧代谢的平衡被破坏而有利于活性氧的积累。活性氧积累的危害之一是引发或加剧膜脂过氧化作用，造成细胞膜系统的损伤，严重时会导致植物细胞死亡。活性氧包括含氧自由基。自由基是具有未配对价电子的原子或原子团。生物体内产生的活性氧主要有超氧自由基(O-2)、羟自由基(OH·)、过氧自由基(ROO·)、烷氧自由基(RO·)、过氧化氢（H2O2）、单线态氧（O21）等。植物对活性氧产生有酶促和非酶促两类防御系统，超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶POD和抗坏血酸过氧化物酶(ASA—POD)等是酶促防御系统的重要保护酶，抗坏血酸(ASA)和还原型谷胱甘肽(GSH)等是非酶促防御系统中的重要抗氧化剂。

丙二醛(MDA)是细胞膜脂过氧化作用的产物之一，它的产生还能加剧膜的损伤。因此，丙二醛产生数量的多少能够代表膜脂过氧化的程度，也可间接反映植物组织的抗氧化能力的强弱。所以在植物衰老生理和抗性生理研究中，丙二醛含量是一个常用指标。

[材料、仪器、药品]

1．材料：植物抗逆性鉴定实验中的四种菠菜样品，即绿色和黄色叶片的高温处理和室温对照。

2．仪器：(1) 分光光度计；(2) 离心机；（3）水浴锅：(4) 天平；(5) 研钵；(6) 剪刀；(7) 5ml刻度离心管；(9) 刻度试管(10ml)；(10) 镊子；(11) 移液管(5ml、2ml、1ml)；（12）冰箱。

3．药品：(1) 0.05mol/L pH7.8磷酸钠缓冲液；(2) 石英砂；(3) 5％三氯乙酸溶液：称取5g三氯乙酸，先用少量蒸馏水溶解，然后定容到100ml；(4) 0.5％硫代巴比妥酸溶液：称取0.5g硫代巴比妥酸，用5％三氯乙酸溶解，定容至100ml，即为0.5％硫代巴比妥酸的5％三氯乙酸溶液。

[方法]

1．丙二醛的提取：取0.5g样品，加入2ml预冷的0.05mol/L pH7.8的磷酸缓冲液，加入少量石英砂，在经过冰浴的研钵内研磨成匀浆，转移到5ml刻度离心试管，将研钵用缓冲液洗净，清洗也移入离心管中，最后用缓冲液定容至5ml。在4500转/min离心10min。上清液即为丙二醛提取液。

2．丙二醛含量测定：吸取2 ml的提取液于刻度试管中，加入0.5％硫代巴比妥酸的5%三氯乙酸溶液3ml，于沸水浴上加热10min，迅速冷却。于4500转/min离心10min。取上清液于532、600nm波长下，以蒸馏水为空白调透光率100%，测定吸光度。

3．结果计算：

(A532—A600) ×V1×V

1.55×10-1×W×V2

丙二醛含量（nmol/g）=

式中：A为吸光度；V1为反应液总量(5m1)；V为提取液总量(5ml)；V2为反应液中的提取液数量(2ml)；W为植物样品重量(0.5g)；1.55×10-1为丙二醛的微摩尔吸光系数（在1升溶液中含有1µmol丙二醛时的吸光度）。

4．注意事项：

(1) 0.1~0.5％的三氯乙酸对MDA—TBA反应较合适，若高于此浓度，其反应液的非专一性吸收偏高；

(2) MDA—TBA显色反应的加热时间，最好控制沸水浴10~15min之间。时间太短或太长均会引起532nm下的光吸收值下降；

(3) 如用MDA作为植物衰老指标，首先应检验被测试材料提取液是否能与TBA反应形成532nm处的吸收峰。否则只测定532、600nm两处A值，计算结果与实际情况不符，测得的高A值是一个假象；

(4) 在有糖类物质干扰条件下(如深度衰老时)，吸光度的增大，不再是由于脂质过氧化产物MDA含量的升高，而是水溶性碳水化合物的增加，由此改变了提取液成分，不能再用532nm、600nm两处A值计算MDA含量，可测定510、532、560nm处的A值，用A532一(A510—A560)/2的值来代表丙二醛与TBA反应液的吸光值。