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关于色素的提取和分离!

来源:www.muyeseed.com   时间:2022-12-05 21:31   点击:155  编辑:admin   手机版

一、关于色素的提取和分离!

提取部分:

①剪:越细越好,尽量去除叶脉等部分。

②加药品:二氧化硅、碳酸钙和丙酮。前两种是粉末状药品,各加少许,后者是有机溶剂,研磨时加约5ml。二氧化硅的作用是使研磨更加充分、迅速;碳酸钙的作用是调节液体的pH,防止叶绿素被破坏保护叶绿素不分解;丙酮用来溶解提取叶绿体中的色素。

③磨:研磨要领是不能一下一下的砸,而是要用力的压 。研磨要迅速、充分。这是因为一是因为丙酮容易挥发;二是为了使叶绿体完全破裂,从而能提取较多的色素;三是叶绿素极不稳定,能被活细胞中的叶绿素酶水解而破坏。

④过滤:将研磨液迅速倒入玻璃漏斗(漏斗基部放一块单层尼龙布)中进行过滤。将滤液收集到试管中,及时用棉塞将试管口塞严。研磨液迅速倒入以及用棉塞是因为研磨加的丙酮很容易挥发。单层尼龙布是为了过滤充分,因为叶片的研磨有残渣。

分离部分:

1.制备滤纸条:将预备在试验桌上的滤纸条一端剪去两个角使之呈梯形。 呈梯形,根据小孔(边缘)扩散原理,物质分子沿边缘扩散速度要大于里边扩散的速度,因此要将滤纸条的一端剪去两角,主要是为了延长边缘长度,这样可以使色素在滤纸条上扩散均匀,便于观察实验结果。

2.画滤液细线:细,匀,直,浓。最好之前用铅笔轻轻地画一道线,放置色素带重叠,用提取液反复划好几次,每次划完尽量吹干,不要弄破纸条。用铅笔可以划得整齐,这样让每一种色素都有共同的起点。铅笔而不用钢笔是不易扩散。画得越细越多次,就越浓,越好跑,分得开,越清楚

3.层析分离叶绿体中的色素:将纸条画有滤液细线的一端置于烧杯中的层析液中,注意千万不要将滤液细线浸没在层析液中,因为色素易溶解于层析液中,导致色素带不清晰。层析液是挥发性较强的有机溶剂,并且具有一定的毒性,所以在操作中要尽量用培养皿盖住烧杯口。

4.观察实验结果:最后滤纸条上将分离出四条色素带,颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色,四种色素分别是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b。

还有疑问吗?

上面有画滤液细线的作用:让每一种色素都有共同的起点。跑步也有线的啊。画得越细越多次,就越浓,越好跑,分得开,越清楚。一定要细并且要直,这样可以防止色素带之间的重叠。画线时一般要重复多次,使滤液细线上的色素多一些,分离后的色素带更加清晰。但一次画完后,必须待其干后再画第二次,以确保滤液细线较细。

二、如何提取植物中的色素并保存?

植物中的色素都是有机物为主。直接打成汁,过滤液体,晒干就行了。至于要制作成油墨一类的东西,你得看油墨的配方了,复杂的要死。

三、高中生物教材提取植物色素的实验

滤液中含有四中色素,画的滤液线要细而直,这样可以让色素在同一个起跑线上,将虑纸放到层析液中,溶解度以及含量不同的色素,跑速度不同,这样就可以分离色素了.希望能解决你的问题

四、食品中色素的提取

实验四 从番茄中提取番茄红素和B-胡萝卜素

一、引言

番茄中含有番茄红素和少量的B-胡萝卜素,二者均属于类胡萝卜素。类胡萝卜素为多烯类色素,不溶于水而溶于脂溶性有机溶剂。本实验先用乙醇将番茄中的水脱去,再用二氯甲烷萃取类胡萝卜素。因为二氯甲烷不与水混溶,故只有除去水分后才能有效地从组织中萃取出类胡萝卜素。根据番茄红素与B-胡萝卜素极性的差别,用柱层析可以将它们分离。分离效果可以用薄层层析进行检验。

二、实验材料和试剂

新鲜番茄(或番茄酱)。

95%乙醇;二氯甲烷;石油醚(60~90℃);氯仿;中性或酸性氧化铝(柱层析用);环乙烷;硅胶G;饱和氯化钠溶液;无水硫酸钠。

三、实验步骤

1. 原料处理与色素提取

称取新鲜番茄浆[1]20g于100ml圆底烧瓶中,加95%乙醇40ml,摇匀,装上回流冷凝管,在水浴上加热回流5分钟,趁热抽滤,只将溶液倒出,残渣留在瓶内,加入30ml二氯甲烷,水浴上加热回流5分钟,将上层溶液倾出抽滤,固体仍保留在烧瓶内,再加10ml二氯甲烷重复萃取一次。合并乙醇和两次二氯甲烷提取液,倒入分液漏斗中,加5ml饱和氯化钠溶液(有利分层),振摇,静置分层。分出橙黄色有机相,使其流经一个在颈部塞有疏松棉花且在棉花上铺一层1cm厚的无水硫酸钠的三角漏斗,以除去微量水分。将此溶液储存于干燥的有塞子的锥形瓶中。层析之前,将此溶液在通风橱中用热水浴蒸发至干。

2. 柱层析分离

取一支长15cm左右内径为1~1.2cm的层析柱,柱内装有用石油醚调制的氧化铝[2]。将粗制的类胡萝卜素溶解于4ml苯中,用滴管在氧化铝表面附近沿柱壁缓缓加入柱中(留1~2滴供以后的薄层层析用),打开活塞,至有色物料在拄顶刚流干时即关闭活塞。用滴管取几毫升石油醚,沿柱壁洗下色素,并通过放出溶剂至柱顶刚流干,从而使色素吸附在柱上。然后加大量的石油醚洗脱。黄色的B-胡萝卜素在柱中移动较快,红色的番茄红素移动较慢。收集洗脱液至黄色的B-胡萝卜素从柱上完全除去,然后用极性较大的氯仿作洗脱剂洗脱番茄红素(注意更换接收瓶)。将收集到的两个部分在通风橱内用热水浴蒸发至干。将样品分别溶于尽可能少的二氯甲烷中,尽快进行薄层层析。

3. 薄层层析检验

在用硅胶G铺成的薄板[3]上距离底边约1cm处,分别用毛细管点上三个样品,中间点为未分离的混合物,两边分别点上分离得到的B-胡萝卜素和番茄红素。可以多次点样,即点完一次,待溶剂挥发后再在原来的位置上点样。但要注意,必须在同一位置上点,而且样品斑点尽量小。点样时毛细管只要轻轻接触板面即可,切不可划破硅胶层。样品之间的距离为1~1.5cm。将此板放入装有环已烷作展开剂的层析缸中,盖上盖子。切勿让展开剂浸没样品斑点。待溶剂展开至10cm左右时,取出层析板。因斑点会氧化而迅速消失,故要用铅笔立即圈出。计算不同样品的R1值,比较不同样品R1值大小的原因以及分离效果。

四、注释

[1 ] 新鲜番茄浆的制备:将新鲜番茄洗净,用捣碎机捣碎或用市售的番茄酱。

[2] 氧化铝层析柱的装填方法:将层析柱垂直固定于铁架上,铺上一层薄薄的石英砂,关闭活塞。称取15g氧化铝置于50ml锥形瓶中,加入15ml石油醚(顺序不能反)边加边搅,且不断旋摇直至成均匀浆液(稠厚但能流动),向柱内加入溶剂(石油醚)至半满,然后开启活塞让溶剂以每秒一滴的速度流入小锥瓶中,摇动浆液,不断地逐渐倾入正在流出溶剂的柱子中,不断用木棒或带橡皮管的玻璃棒轻轻敲击柱身,使顶部成水平面,将收集到的溶剂在柱内反复循环几次,以保证沉降完全和装紧柱。整个过程不能让柱流干。待溶剂刚好放至柱顶刚变干时即可上样。

[3] 硅胶G薄层板的制备:将4g硅胶G置于一小烧杯中,加入8ml蒸馏水不断搅拌至浆糊状,倾倒在洗净的玻板上(18 x 6cm),流平,或用涂布器铺板,并轻轻敲打均匀,在室温放置半小时凉干,然后移入烘箱,缓慢升温至105~110℃恒温活化半小时,取出放入干燥器中备用。

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