从饮水中分离大肠杆菌 ①制作伊红美蓝培养基,趁热注入培养皿中,凝成平板,待用。 ②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水,按1:10稀释。 ③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。 ④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18~24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落,菌落中心呈暗蓝黑色,发金属光泽。 ⑤将菌落接种于哗乏糕何蕹蛊革坍宫开斜面培养基上(由营养琼脂培养基制成)。 也可以从土壤中提取,当然从粪便中提取更是没有问题。
生化鉴定常用三糖铁琼脂(TSIA)和KIA/MIU(AA+-/++-)和IMVC(++--)来初步鉴定。最后鉴定依据全面生化反应,典型的大肠埃希菌的基本生化反应特征:TSIA(双糖铁)产酸/产气,产气、CIT(枸橼酸盐)阴性、URE(脲酶)阴性、IDN(吲哚)阳性、MOT(动力)+/-、ORN(鸟氨酸)+/-。
本标准代替GB4789.3—2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》、GB/T4789.32—2002《食品卫生微生物学检验 大肠菌群的快速检测》和SN/T0169—2010《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》大肠菌群计数部分。
本标准与GB4789.3—2010相比,主要变化如下:
———增加了检验原理;
———修改了适用范围;
———修改了典型菌落的形态描述;
———修改了第二法平板菌落数的选择;
———修改了第二法证实试验;
———修改了第二法平板计数的报告。
EHEC的血清型>50种,最具代表性的是O157:H7,在北美许多地区, O157:H7占肠道分离病原的第二位或第三位(多于志贺菌和耶尔森菌),是从血便中分离到的最常见的病原菌,分离率占血便的40%,6、7、8三个月O157:H7感染的发生率最高。 且O157是4岁以下儿童急性肾功能衰竭的主要病原菌,所以CDC提出应将大肠埃希菌O157:H7列为常规检测项目。
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