生物素通过噻吩环戊酸侧链上的什么部位与多种大分子偶联

生物素的活化与活化生物掘拍素的标记 03:33 1． 生物素的活化 生物素预先活化后，通过噻吩环的戊酸侧链上羧基与抗体、酶等生物大分子以酰胺键偶联。活化生物素的制备是获得高敏感度BAS制剂的关键环节。常用方法有以下几种： 1） 生物素N―羟基丁二酰亚胺酯（biotinyl-N-hydroxy-succinnimide，BNHS）的制备：取生物素1g混悬于12 ml，判春羡N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，加人0．6g N-羟基丁二酰亚胺(HOSU)和0. 8 g二环己基碳二亚胺(DCC)，置于密闭容器内，室温下磁力搅拌作用过夜。过滤，滤液经旋转蒸干。加10mL乙醚洗涤，继加200 ml异丙醇使其重结晶，获得白色粉末状晶体。 BNHS酯键中的-C=0基团可与蛋白质分子中赖氨酸的氨基结合，使生物素标记在蛋白分子上，含赖氨酸残基越多，或蛋白质的等电点在pI 6.0以上，其标记效果越好。因此，BNHS适用于标记抗体森竖及中性和偏碱性的抗原。 2）长臂活化生物素(N-hydroxy-succinimido-6-biotinyl amido hexanoate，BCNHS)的制备生物素的分子量仅为244.31，当与抗体或酶结合后应用于免疫试验时，极易受到大分子蛋白空间位阻效应(steric hindrance)的影响。使用长臂生物素可以减少位阻效应，提高试验的灵敏度。长臂生物素是在生...